Biosintesis selulosa. Sintesis sukrosa dan polisakarida Teks karya ilmiah dengan topik "Biosintesis selulosa bakteri oleh kultur Medusomyces gisevii"

Dinding sel terbentuk sebagai hasil dari perkembangan lamina median. Segera setelah pembelahan lengkap dari inti sel tumbuhan di telofase mitosis, ia terbentuk di sel yang membelah. phragmoplast.Ini terdiri dari banyak vesikula membran pipih - phragmos,mengandung komponen dinding sel. Sitoskeleton terlibat dalam konstruksi mereka. Semua polisakarida dinding sel, kecuali selulosa, disintesis dalam alat Gold-ji. Mereka dikemas ke dalam vesikula yang diangkut ke tempat tumbuh

piring median dan bergabung dengannya. Plat median meningkat menuju plasmalemma dan bergabung dengannya, membagi dua sel anak. Akhirnya, dinding sel yang baru terbentuk menghubungkan ke dinding sel primer yang sudah ada sebelumnya.

Hampir semua komponen "nonselulosa" dari dinding sel - polisakarida, protein struktural, berbagai macam enzim - dibentuk dalam badan Golgi dan dalam vesikelnya secara terkoordinasi diarahkan ke dinding sel.

Sejauh ini, tidak ada gen yang diidentifikasi yang menyandikan sintase polisakarida yang terlibat dalam sintesis tulang punggung polimer "nonselulosa". Gen untuk beberapa fucosyl dan galactosyltransferases telah diidentifikasi yang menempelkan gula individu ke rantai utama.

Polimer yang disintesis dari luar membran plasma adalah selulosa dan kalosa. Kemanfaatan ini menjadi jelas jika kita memperhitungkan panjang mikrofibril selulosa yang terbentuk dan kebutuhan pengemasan kerawang mereka ke dalam dinding sel. Kalosa berbeda dari selulosa dengan adanya rantai β 1 → 3-D-glukan, yang dapat membentuk dupleks heliks dan tripleks. Kalosa terbentuk di beberapa jenis sel pada tahap tertentu pembentukan dinding sel, misalnya dalam tabung serbuk sari berkecambah atau lamina median sel yang membelah. Callose juga dapat disintesis selama reaksi stres atau sebagai respons terhadap infeksi jamur.

Sintesis selulosa dikatalisis oleh kompleks enzim multimerik yang terletak di ujung mikrofibril selulosa yang memanjang. Kompleks terminal ini terlihat jelas di bawah mikroskop elektron.

Angka: 1.30. Skema struktur dan kerja sintase selulosa

Pada beberapa rumput laut, kompleks terminal sintesis selulosa bersifat linier; di semua angiospermae, mereka membentuk struktur roset. Kompleks terminal muncul di membran plasmalemma pada saat aktivasi sintesis selulosa.

Substrat awal untuk sintase selulosa adalah UDP-glukosa. Ini dibentuk oleh enzim sukrosa sintase langsung dari sukrosa. Sejumlah isoform enzim ini ditemukan di membran plasma. Mereka berhubungan dengan sintase selulosa dan dapat memasok UDP-glukosa langsung ke pusat katalitiknya (Gbr. 1.30).

Baru-baru ini, beberapa gen tumbuhan telah diidentifikasi yang mengkode enzim untuk sintesis selulosa, khususnya gen CesA, yang diekspresikan secara intens dalam serat kapas selama sintesis aktif selulosa dinding sel sekunder. Polipeptida yang dikodekan oleh gen ini memiliki delapan domain transmembran dan bermassa sekitar 110 kDa. Penemuan gen CesA memungkinkan untuk mengidentifikasi sejumlah gen lain yang mengkode sintase polisakarida dinding sel.

Pada tumbuhan, dalam proses fotosintesis, tidak hanya ester fosfat dari gula atau gula sederhana yang terbentuk, tetapi juga bentuk karbohidrat yang lebih kompleks - sukrosa, pati, serat. Penguraian karbohidrat kompleks menjadi karbohidrat sederhana juga berlangsung sangat cepat. Hal ini diamati, misalnya, selama perkecambahan biji, penuaan organ vegetatif, dll. Gula sederhana atau ester fosfornya terbentuk selama dekomposisi mengalir ke organ reproduksi, di mana karbohidrat kompleks disintesis lagi darinya. Dan, akhirnya, pada tumbuhan, proses transformasi karbohidrat timbal balik sangat mudah.

Interkonversi monosakarida melewati ester fosfat gula atau turunan difosfat uridinnya (turunan UDP). Gula turunan UDP adalah satu atau lain gula yang digabungkan melalui dua residu asam fosfat dengan uridin, misalnya:

Gambar 1. Glukosa Uridine Diphosphate

Sintesis sukrosa

Sukrosa adalah ligosakarida terpenting yang diproduksi pada tumbuhan, dalam bentuk ikatan karbon dan energi yang diangkut ke seluruh tumbuhan. Ini terdiri dari residu α-D-glukosa dalam bentuk piranosanya yang dihubungkan oleh ikatan glikosidik ke β-D-fruktosa dalam bentuk furanosanya. Karena atom karbon anomerik dari kedua monosakarida terlibat dalam pembentukan ikatan glikosidik, gugus hemiasetalnya terhalang dan tidak ada cincin yang dapat terbuka. Jadi, sukrosa adalah gula non-pereduksi (tidak mereduksi reagen Fehling dan Benediktus), dan kecuali sensitivitas ekstrimnya terhadap hidrolisis asam, sukrosa bersifat inert secara kimiawi. Ketika dipanaskan dengan asam, atau di bawah aksi sukrase (invertase), sukrosa dihidrolisis, membentuk gula invert - campuran glukosa dan fruktosa. Sukrosa sangat larut dalam air dan memiliki rasa yang manis.

Sukrosa digunakan sebagai produk makanan, serta dalam produksi surfaktan (sukrosa ester dengan asam lebih tinggi). Sumber utama produksi sukrosa adalah bit gula, yang mengandung sukrosa hingga 23%, dan tebu, yang batangnya mengandung sukrosa 10–18%. Sekarang telah ditetapkan bahwa sukrosa disintesis tidak hanya dalam kloroplas, tetapi juga dalam sitoplasma sel fotosintesis dari UDP-glukosa dan fruktosa-6-fosfat, yang timbul dari
dihydroxyacetone fosfat. Zat ini terbentuk selama fotosintesis di kloroplas dan kemudian memasuki sitoplasma. Pada jaringan non-fotosintetik (misalnya, dalam endosperm biji jarak yang berkecambah), pembentukan sukrosa dari UDP-glukosa dan fruktosa-6-fosfat juga terjadi di dalam sitoplasma sel.

Sukrosa (tebu, gula bit) adalah disakarida yang paling tersebar luas di alam. Pada tumbuhan, itu terbentuk dari glukosa dan fruktosa. Tahap pertama adalah fosforilasi glukosa:

Glukosa + ATP → glukosa-6-fosfat + ADP,

kemudian glukosa-6-fosfat diisolasi menjadi glukosa-1-fosfat. Glukosa-1-fosfat bergabung dengan UTP, menghasilkan pembelahan asam pirofosfat dan pembentukan senyawa glukosa dengan asam uridin difosfat (UDP) - glukosa uridin difosfat.

Pada saat yang sama, fosforilasi fruktosa terjadi di bawah aksi enzim fruktokinase dengan partisipasi ATP:

fruktosa + ATP → fruktosa-6-fosfat + ADP.

Setelah ini, UDP-glukosa berinteraksi dengan fruktosa-6-fosfat dengan partisipasi enzim sukrosa-fosfat-UDP-glukosiltransferase. Akhirnya, sukrosa-6-fosfat yang dihasilkan dihidrolisis oleh enzim fosfatase untuk membentuk sukrosa bebas. Jadi, untuk biosintesis satu molekul sukrosa, diperlukan 3 ikatan fosfat berenergi tinggi, reaksi ini tidak dapat diubah. Pada jaringan non fotosintetik beberapa tumbuhan, misalnya pada akar bit gula, umbi kentang dan lain-lain, sukrosa dapat dibentuk dari fruktosa bebas:

UDP-glukosa + fruktosa ↔ sukrosa + UDP.

Reaksi tersebut dikatalisis oleh enzim sukrosa-UDP-glukosiltransferase dan, tergantung pada kondisinya, dapat diarahkan baik ke arah sintesis maupun ke arah dekomposisi sukrosa.

Sintesis pati

Pati adalah polisakarida cadangan tanaman, dan dapat disimpan dalam tanaman untuk waktu yang lama, atau dikonsumsi dengan cukup cepat. Untuk waktu yang lama, disimpan di banyak biji, umbi dan rimpang dan hanya digunakan ketika organ ini berkecambah. Untuk waktu yang singkat, pati terbentuk dalam kloroplas selama periode fotosintesis cepat, dan pada periode gelap berikutnya pati dikonsumsi dan mengalir keluar dari daun dalam bentuk sukrosa. Pati selalu terbentuk dan disimpan dalam bentuk butiran pati yang terdapat pada plastida - kloroplas atau amiloplas. Butir pati adalah struktur yang sangat terorganisir, bentuk dan ukurannya sangat beragam, tetapi seringkali merupakan karakteristik dari spesies tumbuhan tertentu. Bentuk biji-bijian bisa bulat, bulat telur, lentikular, atau tidak teratur; ukurannya dapat berkisar dari 1 hingga 100 mikron. Biji pati terbesar ditemukan pada kentang, dan yang terkecil pada beras dan soba. Butir pati mengandung hingga 20% air (10% di antaranya terikat secara kimiawi pada pati) dan sejumlah lapisan konsentris pati. Butir pati dibentuk dengan melapisi lapisan yang baru terbentuk ke lapisan yang sudah ada sebelumnya.

Kandungan mineral dalam pati sangat kecil - 0,2-0,7%, sebagian besar diwakili oleh asam fosfat. Beberapa asam lemak bermolekul tinggi (palmitat, stearat, dll.) Ditemukan pada pati yang kandungannya mencapai 0,6%. Pati adalah campuran dari dua polisakarida - amilosa dan amilopektin. Molekul amilosa adalah rantai panjang dan tidak bercabang yang mengandung 100 hingga beberapa ribu residu glukopiranosa yang dihubungkan oleh ikatan glikosidik. Studi difraksi sinar-X menunjukkan bahwa molekul amilosa memiliki struktur heliks dengan diameter 1,3 nm dengan enam residu glukosa berturut-turut per putaran spiral.

Molekul amilosa larut dalam air panas, tetapi larutan yang dihasilkan tidak stabil dan kemudian terjadi pengendapan amilosa secara spontan, yang dikenal sebagai retrogradasi. Hal ini disebabkan kecenderungan molekul amilosa yang panjang dan tipis untuk berbaris berdampingan dan membentuk agregat yang tidak larut melalui ikatan hidrogen. Glukosa Uridine Diphosphate (UDPC) dapat berfungsi sebagai donor residu glukosa dalam biosintesis amilosa. Untuk pembentukannya dalam media reaksi, diperlukan adanya benih, yang dapat berupa polisakarida yang tersusun dari hanya 3-4 residu glukosa yang dihubungkan oleh ikatan α (1-4).

Sisa glukosa dipindahkan ke akseptor (primer), tempat terjadi pemanjangan rantai. Reaksi mengikuti skema:

UDFG + akseptor (G) k - UDF + akseptor (G) k + 1,

dimana Г - residu glukosa.

Enzim yang mengkatalisis reaksi ini disebut UDPG starch glukosiltransferase.

Pada kebanyakan tanaman, donor aktif glukosa bukanlah UDP-glukosa, melainkan glukosa adenosin difosfat α (ADPG). Reaksi penempelan residu glukosa dari ADPG ke akseptor dengan berat molekul rendah berlangsung dengan cara yang sama dan dikatalisis oleh enzim ADPG-pati-glukosiltransferase. Sintesis molekul amilopektin bercabang yang memiliki ikatan α (1-6) terjadi menggunakan enzim α-glukantransferase (enzim-Q). Enzim-D atau glukosiltransferase, yang membentuk ikatan α (1-4) dan berpartisipasi dalam pembentukan benih, juga terlibat dalam sintesis pati.

Dekomposisi pati terjadi dengan partisipasi dua proses - hidrolisis dan fosforolisis. Dekomposisi hidrolitik pati dilakukan di bawah aksi empat enzim kelas hidrolisis α-amilase, mengkatalisis pembelahan ikatan α (1-4), dan ikatan diputuskan secara acak. Produk akhir dari pemecahan ini adalah maltosa, glukosa, dekstrin. Di bawah aksi β-amilase, ikatan α (1-4) terputus dengan pembentukan residu maltosa. Enzim glukoamilase mengkatalisis pembelahan berurutan residu glukosa dari molekul pati. Amilopektin-1,6-glukosidase atau enzim-R mengkatalisis pemutusan ikatan α (1-6) dalam molekul amilopektin, yaitu bekerja pada titik cabang.

Fosforolisis adalah penambahan asam fosfat di lokasi pemutusan ikatan glukosida antara residu monosakarida dalam rantai polisakarida, dengan pembentukan glukosa-1-fosfat. Reaksi ini dikatalisis oleh enzim glukonfosforilase, yang termasuk dalam kelas transferase. Pati pada tumbuhan dapat mengalami degradasi yang sangat cepat, karena enzim degradasi ditemukan di semua organ tumbuhan.

Sintesis selulosa

Selulosa tidak larut dalam air, hanya membengkak di dalamnya. Dengan hidrolisis asam (mendidih dalam asam sulfat) berubah menjadi glukosa, dengan hidrolisis yang lebih lemah - menjadi selobiosa. Dengan menggunakan analisis difraksi sinar-X, ditemukan bahwa molekul selulosa berbentuk seperti benang. Molekul berfilamen ini, karena ikatan hidrogen, dihubungkan dalam kumpulan 40-60 buah per misel. Di dinding sel tumbuhan, misel selulosa dihubungkan oleh ikatan hidrogen dengan berbagai heteropolisakarida. Misalnya, di maple putih, mereka adalah xyloglucan, arabinogalactan, dan rhamnogalacturon yang saling berhubungan oleh ikatan glikosidik. Selain itu, ada bukti bahwa ekstensin glikoprotein kaya hidroksiprolin khusus terlibat dalam pembangunan dinding sel tumbuhan.

Selulosa dibangun dari residu β-glukosa. Bukan glukosa bebas yang berpartisipasi dalam biosintesis selulosa, tetapi turunan HDF-nya - glukosa guanosin difosfat dengan partisipasi enzim sintetase selulosa sesuai dengan skema:

HDF - glukosa + (glukosa) menjadi → HDF + (glukosa) menjadi + 1

Proses dekomposisi selulosa terutama melalui jalur hidrolitik di bawah aksi enzim selulase menjadi selobiosa disakarida.

Karbohidrat diangkut dalam bentuk sukrosa. Dalam proses fotosintesis, banyak karbohidrat terbentuk, dan dalam hal ini, aliran keluar asimilasi ke bagian lain sel dari kloroplas sangat penting. Penetrasi heksosa terfosforilasi dan sukrosa melalui membran kloroplas sulit; fosfat triosa (PHA dan PDA) paling mudah menembus membran kloroplas. Diasumsikan bahwa karbohidrat kompleks yang dihasilkan terurai menjadi triosa fosfat dan dalam bentuk ini berpindah ke dalam sitoplasma, dimana karbohidrat tersebut dapat berfungsi sebagai bahan untuk resintesis heksosa, sukrosa, dan pati.

Transpor parenkim antar sel dilakukan dengan dua cara - melalui plasmodesmata (simplas) atau melalui ruang bebas (apoplas). Sukrosa yang terbentuk dalam sel mesofil daun didesorbsi ke dalam apoplas. Meninggalkan sel parenkim ke dalam apoplas, sukrosa dibelah oleh invertase menjadi heksosa. Heksosa bergerak sepanjang apoplas ke sel transfer berkas konduksi sepanjang gradien konsentrasi. Saat bersentuhan dengan sel pengirim floem, mereka diubah kembali menjadi sukrosa. Selanjutnya, tabung saringan dibebani, sukrosa mengalir berlawanan dengan gradien konsentrasi, dan diperlukan konsumsi energi (ATP).

Diasumsikan bahwa sukrosa melintasi membran dengan bantuan pembawa dalam kompleks dengan proton. Pada saat yang sama, karena kerja H + -ATP-ase, ion H + dipompa keluar dari sel floem, dan kemudian kembali sepanjang gradien pH, menyeret sukrosa bersama dengan gradien konsentrasinya. Bentuk transpor utama karbohidrat di floem adalah sukrosa (C 12 H 22 O 11). Dalam beberapa spesies, bersama dengan sukrosa, oligosakarida (raffinose, stachyose), serta beberapa alkohol, berfungsi sebagai pengangkut karbohidrat.



Dalam siklus Calvin-Benson, terbentuk fruktosa-6-fosfat (F-6-P), seperti disebutkan di atas. Heksosa fosfat ini dapat diubah oleh enzim tertentu menjadi heksosa terfosforilasi lainnya, yaitu glukosa-6-fosfat (G-6-P) dan glukosa-1-fosfat (G-1-P). Transformasi sebaliknya juga terjadi dengan mudah.

Dari ketiga heksosa fosfat ini, rantai molekul karbohidrat kemudian dibangun, yang digunakan untuk transportasi, penyimpanan, dan reaksi sintesis. Agar konversi tersebut terjadi, heksosa fosfat harus diaktifkan terlebih dahulu. Ini biasanya dicapai sebagai hasil dari keterikatannya pada nukleotida - struktur melingkar kompleks yang mirip dengan ATP asam adenilat. Produk dari reaksi adisi ini adalah turunan nukleotida dari monosakarida, atau gula nukleotida. Uridine diphosphoglucose (UDPG) yang paling umum diproduksi oleh reaksi antara uridine triphosphate (UTP) dan glukosa 1-fosfat (G-1-P). UTP sendiri terbentuk secara tidak langsung, sebagai hasil transfer gugus fosfat dari ATP ke UDP (uridine difosfat).

Nukleotida ATP dan UTP ada di semua sel karena mereka digunakan bersama dengan nukleotida lain dalam sintesis DNA dan RNA.

Gula diangkut melalui tanaman dalam bentuk sukrosa, disakarida yang terdiri dari residu glukosa dan fruktosa (Gambar 5.2). Sukrosa dibentuk oleh reaksi antara UDPG dan F-6-P:

Keseimbangan reaksi ini sangat bergeser ke arah sintesis sukrosa, yang memberikan kemungkinan akumulasi disakarida ini dalam konsentrasi yang signifikan. Untuk penggunaan selanjutnya, sukrosa pertama-tama harus mengalami pembelahan: enzim invertase mengkatalisis hidrolisisnya dengan pembentukan glukosa dan fruktosa bebas.

Energi ikatan glikosidik dalam reaksi seperti itu terbuang percuma, didistribusikan di antara dua molekul. Oleh karena itu, jika glukosa dan fruktosa akan terurai selama respirasi atau berpartisipasi (sebagai bahan mentah) dalam sintesis polisakarida, maka mereka harus menjalani fosforilasi lagi karena ATP. Proses sintesis dan dekomposisi sukrosa dengan jelas menunjukkan bahwa seringkali reaksi anabolik dan katabolik (reaksi sintesis dan dekomposisi) mengikuti jalur yang berbeda.

Sintesis pati dan selulosa

Rantai polimer panjang pati dan selulosa dibangun dari ikatan dasar yang sama - residu glukosa, hanya dihubungkan dengan cara yang berbeda. Perbedaan struktural ini bertanggung jawab atas fakta bahwa dua polimer glukosa (glukan) yang dianggap berbeda secara signifikan di alam; pati, misalnya, mudah dicerna dalam tubuh manusia "dan selulosa sama sekali tidak dicerna. Perbedaan utamanya adalah atom karbon ke-1 dan ke-4 dari dua residu glukosa yang berdekatan dihubungkan oleh ikatan-α dalam pati, dan dalam selulosa (β -links (Gambar 5.3) Pati disajikan dalam dua bentuk: polimer linier, atau amilosa, yang tidak mengandung ikatan lain, kecuali untuk α-1,4-glikosidik, dan polimer bercabang, atau amilopektin, di mana, bersama dengan α-1,4 Ikatan-ikatan glikosidik juga terdapat 1,6-ikatan Perbedaan sifat ikatan juga menentukan tatanan spasial rantai polimer yang tidak sama. Pati merupakan polisakarida cadangan utama tumbuhan. Ia tidak larut dalam air dan diendapkan lapis demi lapis pada butir pati yang terkandung dalam kloroplas (lihat Gambar. 2.20) atau dalam leukoplas bebas klorofil dari jaringan penyimpanan batang, akar dan biji. Kadang-kadang sel-sel jaringan penyimpanan tersumbat oleh butiran pati, yang mudah diidentifikasi di dalamnya, karena mampu menodai membiru dengan yodium. Karena tidak dapat larut dalam air, pati, tidak seperti sukrosa dan heksosa, tidak menyebabkan efek osmotik dalam sel (lihat Bab 6). Oleh karena itu, pembentukan pati dalam sel daun selama periode fotosintesis yang intens mencegah penekanan yang terakhir, yang terjadi sebagai akibat dari akumulasi produk fotosintesis. Dalam gelap, pati secara bertahap dihidrolisis lagi untuk membentuk glukosa fosfat, yang kemudian diubah menjadi sukrosa, yang diangkut ke bagian lain dari tanaman.

Angka: 5.3. Struktur pati (A) dan selulosa (B) (Dimodifikasi menurut J. Bonner, AW Galston. 1952. Principles of Plant Physiology, San Francisco, WH Freeman and Co.) Perlu diketahui bahwa rumus kimia pati dan selulosa adalah sama, tetapi berbeda polisakarida ini adalah orientasi spasial jembatan oksigen mereka. A. Pati, polisakarida penyimpanan utama tanaman, dibuat dari dua komponen berbeda: amilosa, dengan unit glukosa yang panjang dan tidak bercabang, dan amilopektin, yang terdiri dari sejumlah besar rantai bercabang pendek. B. Selulosa, komponen utama dinding sel primer, berbentuk rantai polimer panjang. Rantai tersebut digabungkan menjadi untaian misel, dan yang terakhir menjadi mikrofibril. Mikrofibril yang cukup besar untuk dilihat dengan mikroskop elektron merupakan "dasar" dan "pakan" dari dinding sel

Produk awal untuk sintesis pati adalah adenosine diphosphoglucose (ADPG), yang dibentuk dari ATP dan G-1-P:

Molekul pati dibangun dengan secara bertahap menambahkan satu residu glukosa satu demi satu dalam reaksi ADPG dengan rantai glukosa yang telah dibentuk sebelumnya:

Dengan kandungan sukrosa yang rendah, pati terurai dan. diubah menjadi sukrosa. Namun, pada awalnya itu dipecah menjadi residu glukosa dan residu asam fosfat ditambahkan ke masing-masingnya, yaitu, G-1-P terbentuk, yang memastikan konservasi energi ikat:

G-1-P ini kemudian dapat digunakan untuk mensintesis sukrosa, yang kami jelaskan di atas. Dalam biji dan beberapa organ lain, di mana sejumlah besar pati secara bersamaan membusuk, ia terurai menjadi maltosa disakarida (G-G) di bawah aksi aα-amilase. Maltosa kemudian terurai menjadi glukosa, dari mana (untuk transportasi) sukrosa disintesis lagi. Dalam jalur kedua ini, tidak seperti yang pertama, energi pengikat tidak disimpan, jadi di sini ATP diperlukan untuk konversi glukosa menjadi glukosa-6-P.

Selulosa, karbohidrat paling melimpah di bumi, merupakan komponen utama dinding sel primer. Molekulnya dibangun dengan cara yang sama seperti molekul pati dibangun, dengan perbedaan, bagaimanapun, bahwa peran donor glukosa dimainkan oleh turunan nukleotida lain dari monosakarida - guanosine diphosphoglucose (GDPG) - dan bahwa ikatan antara unit monomer bukan milik α-, tetapi ke tipe β.

Dalam beberapa kasus, UDPG juga dapat menjadi donor glukosa untuk sintesis selulosa.

Dalam tubuh tumbuhan tingkat tinggi, selulosa jarang terdegradasi (kecuali pembusukan yang disebabkan oleh aktivitas mikroba). Dua pengecualian terkenal untuk aturan ini berkaitan dengan sel di zona pemisahan daun, terbentuk sebelum daun rontok, dan pembuluh xilem, di mana dinding melintang larut. Di zona pemisahan daun, enzim selulase menghancurkan dinding sel, membelah selulosa yang terkandung di dalamnya menjadi unit monomer individu, yaitu glukosa. Dinding sel yang melemah oleh proses ini akhirnya pecah dan daunnya rontok.

Mikrofibril selulosa di dinding sel disatukan oleh matriks rantai polisakarida campuran, terutama xyloglucans dan arabinogalactans (lihat Gambar 2.31). (Xilosa dan arabinosa adalah gula lima karbon (pentosa), dan galaktosa adalah heksosa, mirip dengan glukosa.) Polisakarida ini juga disintesis dari prekursor, gula nukleotida, terutama dalam diktiosom. Vesikel yang terlepas dari diktiosom akhirnya bergabung dengan plasmalemma dan dengan cara ini mentransfer isinya ke dinding sel pembentuk.

Jadi, semua polisakarida dengan mudah melewati satu sama lain, tetapi sintesisnya selalu melalui tahap gula nukleotida, sedangkan peluruhan terjadi dengan cara yang lebih langsung.

Kebanyakan makanan nabati mengandung apa yang disebut serat dan pektin, yang tidak dapat dicerna di saluran pencernaan. Namun, mereka diperlukan untuk seseorang. Jika makanan buruk di dalamnya, atonia usus dan konstipasi terjadi. Jadi, serat merupakan pengatur fungsi motorik usus.

Serat meningkatkan fungsi usus, memperlambat pembusukan dan pembentukan gas, dan mengurangi penyerapan zat berbahaya tertentu. Jadi, misalnya untuk pencegahan penyakit akibat kerja pada mereka yang bekerja dengan garam logam dan zat radioaktif, dianjurkan makan kismis merah yang mengandung banyak pektin.

Polisakarida: Serat

Serat (selulosa) - polisakarida yang menyusun sebagian besar dinding sel tumbuhan. Serat tidak larut dalam air, hanya akan membengkak di dalamnya. Serat membentuk lebih dari 50% kayu. Dalam serat kapas, lebih dari 90%. Saat direbus dengan asam sulfat kuat, serat akan diubah seluruhnya menjadi glukosa. Dengan hidrolisis yang lebih lemah, selobiosa diperoleh dari serat.

Dalam molekul serat, residu selobiosa dihubungkan oleh ikatan glikosidik dalam bentuk rantai panjang. Berat molekul serat belum ditentukan secara tepat. Dipercaya bahwa serat bukanlah zat individu, tetapi campuran zat homolog. Berat molekul selulosa yang diperoleh dari berbagai sumber berfluktuasi cukup kuat: kapas - 330.000 (dalam rantai residu glikosidik 2020); rami - 430.000 (sisa 2660), kayu cemara - 220.000 (sisa 1360). Dengan bantuan analisis difraksi sinar-X, ditemukan bahwa molekul serat bersifat filamen. Molekul berfilamen ini digabungkan menjadi bundel - misel. Setiap misel mengandung kira-kira 40-60 molekul serat.

Kombinasi molekul serat individu menjadi misel terjadi karena ikatan hidrogen, yang dilakukan baik karena atom hidrogen dari gugus hidroksil serat, dan karena molekul air yang diserap oleh serat. Di dinding sel tumbuhan, misel selulosa berikatan hidrogen dengan berbagai heteropolisakarida. Misalnya, dalam maple putih, mereka adalah xiloglikan yang saling berhubungan dengan ikatan glikosidik, yang terdiri dari residu glukosa, xilosa, galaktosa, dan fukosa; arabinogalactan, dibangun dari sisa-sisa arabinose dan galactose; rhamnogalacturonan, dibentuk oleh residu asam galakturonat dan rhamnose. Selain itu, terdapat bukti bahwa ekstensin glikoprotein khusus yang kaya hidroksiprolin juga terlibat dalam pembangunan dinding sel tumbuhan, terutama pada tahap awal pembentukannya. Saat lignifikasi dinding sel, lignin juga terakumulasi di dalamnya.

Serat tidak dicerna di saluran pencernaan manusia. Itu hanya dicerna oleh ruminansia, di dalam perutnya terdapat bakteri khusus yang menghidrolisis serat dengan bantuan enzim selulase yang disekresikan oleh mereka.

Hemiselulosa (semi-selulosa). Dengan nama ini, sekelompok besar polisakarida dengan berat molekul tinggi yang tidak larut dalam air, tetapi larut dalam larutan alkali, disatukan. Hemiselulosa ditemukan dalam jumlah yang signifikan di bagian tanaman yang mengalami lignifikasi: jerami, biji-bijian, kacang-kacangan, kayu, tongkol jagung. Sejumlah besar hemiselulosa ditemukan di dedak. Hemiselulosa lebih mudah dihidrolisis oleh asam daripada serat. Pada saat yang sama, mereka membentuk mannose, galactose, arabinose atau xylose, dan oleh karena itu masing-masing diberi nama - mannans, galactans dan pentosans (araban atau xylan).

1

Proses biosintesis selulosa bakterial (BC) pada hidrolisat enzimatis bahan lignoselulosa miscanthus telah dipelajari. Bahan lignoselulosa diperoleh dengan memperlakukan miscanthus dengan larutan encer asam nitrat di pabrik percontohan. Hidrolisis enzimatis dilakukan dalam fermentor 11 l. Biosintesis BC dilakukan dengan menggunakan kultur simbiosis Medusomyces gisevii Sa-12. Telah ditetapkan bahwa jumlah bakteri asam asetat selama budidaya 1,2 kali lebih sedikit dibandingkan dengan ragi. Pemanfaatan utama substrat terjadi pada 6 hari budidaya, konstanta pemanfaatan substrat 0,234 hari-1. Hal ini menunjukkan bahwa hidrolisat enzimatik dari bahan miscanthus lignoselulosa bukan merupakan media nutrisi jinak untuk biosintesis BC, rendemen BC sebesar 5,6%, yaitu 1,6 kali lebih sedikit daripada rendemen pada media nutrisi sintetik. Telah ditetapkan bahwa selulosa bakteri yang diperoleh pada media ini murni secara kimiawi.

selulosa bakteri

Medusomyces gisevii

spektroskopi inframerah

hidrolisat enzimatik

miscanthus

1. Selulosa bakteri yang disintesis oleh Gluconacetobacter hansenii untuk digunakan dalam pengobatan / T.I. Gromovs dan [lainnya] // Biokimia Terapan dan Mikrobiologi. - 2017. - T. 53, No. 1. - Hal.69–75.

2. Prospek penggunaan selulosa bakteri dalam produk daging / T.I. Guntur dan [lainnya] // Industri Daging. - 2013. - No. 4. - Hlm 32–35.

3. Octave S. Biorefinery: menuju metabolisme industri / S. Octave, D. Thomas // Biochimie. - 2009. - No. 91. - Hlm 659–664.

4. Gismatulina Y.A., Budaeva V.V., Sakovich G.V., Veprev S.G., Shumny V.K. Selulosa dari berbagai bagian soranovskii miscanthus // Jurnal Genetika Rusia: Penelitian Terapan. - 2015. - Vol. 5, nomor 1. - Hlm. 60–68.

5. Gismatulina Yu.A. Perbandingan sifat fisikokimia selulosa diperoleh dengan metode gabungan dari daun dan batang miscanthus / Yu.A. Gismatulina / Buletin Ilmu Altai. - 2014. - No. 1 (19). - S. 302–307.

6. Makarova E.I. Biokonversi bahan baku yang tidak mengandung selulosa makanan: tanaman energi dan limbah pertanian: dis. ... Cand. teknis sains. - Shchelkovo, 2015. - 161 hal.

7. Gladysheva E.K. Ciri ciri struktur selulosa bakteri yang disintesis pada hidrolisat enzimatis dari bahan lignoselulosa cangkang buah oat / E.K. Gladysheva, E.A. Skiba, L.A. Aleshina // Buletin Polzunovsky. - 2016. - No. 4–1. - S. 152-156.

8. Skiba E.A., Budaeva V.V., Baibakova O.V., Udoratina E.V., Shakhmatov E.G., Shcherbakova T.P., Kuchin A.V., Sakovich G.V. Hidrolisis Enzimatis Bahan Lignoselulosa dalam Media Berair dan Sintesis Mikrobiologis Selanjutnya dari Bioetanol // Katalisis di Industri. - 2016. - Vol. 8, nomor 2. - Hlm 168–175.

9. Skiba E.A. Metode penentuan kualitas biologi hidrolisat dari bahan baku yang mengandung selulosa menggunakan strain Saccharomyces cerevisiae VKPM Y-1693 / E.A. Skiba // Izvestiya vuzov. Kimia dan bioteknologi terapan. - 2016. - No. 1 (16). - S. 34–44.

10. Gladysheva E.K. Biosintesis selulosa bakteri dengan kultur Medusomyces gisevii / E.K. Gladysheva, E.A. Skiba // Buletin Teknologi Rekayasa Universitas Negeri Voronezh. - 2015. - No. 3. - Hal 149-156.

11. Gladysheva E.K. Investigasi pengaruh suhu pada sintesis selulosa bakteri oleh produsen Medusomyces gisevii / E.K. Gladysheva // Teknologi tinggi modern. - 2016. - No. 8–1. - S. 36-40.

12. Yurkevich D.I. Medusomycete (Kombucha): sejarah ilmiah, komposisi, ciri fisiologi dan metabolisme / D.I. Yurkevich, V.P. Kutyshenko // Biofisika. - 2002. - No. 6. - Hal. 1116–1129.

13. Yang, X.-Y., Huang C., Guo H.-J., Xiong L., Li Y.-Y., Zhang H.-R., Chen X.-D. Biokonversi asam hidrolisat rumput gajah (Pennisetum purpureum) menjadi selulosa bakteri oleh Gluconacetobacter xylinus // Journal of Applied Microbiology. - 2013. - No. 115. - Hlm 995-1002.

14. Yarovenko V.L. Teknologi alkohol / V.L. Yarovenko, V.A. Marinchenko, V.A. Smirnov. - M .: Kolos, 1999. - 464 hal.

15. Buku referensi baru ahli kimia dan teknolog. Bahan baku dan produk industri zat organik dan anorganik. Ch. ΙΙ. - SPb .: NPO Professional, 2006. - 1142 hal.

Peningkatan skala proses dan penerapan dalam praktik produksi bioteknologi bergantung pada faktor-faktor seperti ketersediaan bahan baku murah massal yang dapat direproduksi; kemudahan transformasi bahan mentah menjadi media nutrisi; kemungkinan desain perangkat keras produksi dengan peralatan standar atau baru yang efisien; hasil tinggi dari produk target dan memastikan standar kualitasnya. Mengingat prospek penggunaan BC di berbagai bidang, maka perlu diciptakan produksi industrinya, sedangkan tugas pentingnya adalah menemukan sumber karbon yang cocok yang memiliki biaya rendah dan tidak bersaing dengan produk pangan. Arah sebenarnya untuk memperoleh BC adalah penggunaan bahan baku yang mengandung selulosa untuk mendapatkan media nutrisi alternatif darinya.

Penggunaan besar-besaran sumber daya fosil selama abad terakhir dan masalah pencemaran yang terkait telah menyebabkan sejumlah besar masalah lingkungan dan ekonomi. Agaknya, sumber daya ini akan habis dalam waktu dekat. Alasan-alasan ini berkontribusi pada transisi progresif menuju ekonomi berdasarkan bahan terbarukan (biomassa) sebagai bahan mentah untuk produksi bahan kimia, bahan, bahan bakar, dan energi dalam apa yang disebut konsep biokonversi. Selulosa adalah salah satu polisakarida paling melimpah dan dianggap sebagai sumber yang tidak ada habisnya dan serbaguna. Sangat menjanjikan untuk menggunakan apa yang disebut energi, yaitu. tanaman cepat tumbuh: miscanthus, millet, sorgum, dll. ... Miscanthus adalah genus tanaman herba abadi dari keluarga bluegrass. Tumbuhan ini tingginya mencapai 200 cm, batang tegak, daun pipih sederhana, pucuk lancip, pangkal berbentuk baji, perbungaan berbentuk malai. Tanaman ini merupakan tanaman serealia tahunan dan mulai dari tahun ketiga budidaya, setiap tahun dapat menghasilkan 10-15 t / ha / tahun biomassa kering di satu lahan selama 15-20 tahun, yang setara dengan 4-6 t / ha selulosa murni.

IPCET SB RAS telah mengembangkan teknologi untuk produksi hidrolisat enzimatis dari miscanthus. Miscanthus sebelumnya menjalani perawatan kimia dengan larutan encer asam dan / atau alkali, dan kemudian ke hidrolisis enzimatis. Investigasi proses biosintesis BC pada hidrolisat enzimatik dari bahan lignoselulosa lambung oat menunjukkan bahwa untuk sintesis mikrobiologi yang berhasil, hidrolisat enzimatik harus berkualitas baik secara biologis.

Dalam pekerjaan ini, bahan lignoselulosa (LCM) miscanthus dipilih sebagai substrat untuk hidrolisis enzimatik. LMC miscanthus diperoleh dengan memproses bahan mentah dalam satu tahap dengan larutan encer asam nitrat pada tekanan atmosfer di peralatan standar. Telah ditunjukkan bahwa hidrolisat enzimatik yang diperoleh dari LMC miscanthus secara biologis jinak untuk biosintesis etanol dan tidak memerlukan pemrosesan tambahan untuk membebaskannya dari kotoran berbahaya.

Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mempelajari proses biosintesis BC pada hidrolisat enzimatik dari LCM miscanthus dan untuk mempelajari struktur sampel yang diperoleh dengan spektroskopi inframerah. Perlu dicatat bahwa masalah ini masih ambigu, karena produsen BC lebih menuntut komposisi media nutrien, oleh karena itu data kualitas media untuk khamir tidak dapat diekstrapolasi menjadi mikroorganisme penyintesis selulosa.

Bahan dan metode penelitian

LMC miscanthus diperoleh dengan perlakuan dengan larutan encer asam nitrat dalam produksi percontohan IPCET SB RAS dan memiliki komposisi berikut (%, dalam hal bahan kering): fraksi massa lignin yang tidak larut dalam asam - 10,6, fraksi massa abu - 4,8, fraksi massa selulosa menurut Kurschner - 86,7, fraksi massa pentosans - 7,9.

Hidrolisis enzimatis miscanthus LCM dilakukan dalam fermentor 11 L dalam media berair pada suhu 47 ± 2 ° C selama 72 jam menggunakan preparat enzim Cellolux-A (0,04 g / g substrat) dan Bruzheim BGX (0,1 ml / g substrat) ), keasaman aktif dipertahankan pada level 4,7 ± 0,2 dengan bantuan amonium hidroksida dan asam ortofosfat, konsentrasi awal substrat adalah 60 g / L, metode ini dijelaskan secara lebih rinci dalam pekerjaan.

Hidrolisat enzimatis yang dihasilkan disaring dari residu substrat di bawah vakum. Hidrolisat adalah cairan merah transparan dengan bau asam, keasaman aktif 4,7 unit. pH. Jumlah total zat pereduksi (RS) adalah 49,0 g / l, dimana xilosa adalah 2,8 g / l. Infus teh dingin ditambahkan ke hidrolisat enzimatik LMC yang disaring dari miscanthus (1 L air suling dididihkan, teh hitam kering ditambahkan, ekstraksi dilakukan selama 15 menit, didinginkan dan disaring). Pada saat yang sama, media nutrisi distandarisasi dalam hal kandungan RS dari 20 hingga 25 g / l dan kandungan ekstrak teh dari 1,6 g / l menjadi 4,8 g / l.

Kultur simbiosis Medusomyces gisevii Sa-12 digunakan sebagai penghasil biosintesis BC. Awalnya, kultur diadaptasi pada media nutrisi yang dipelajari. Inokulum dimasukkan ke dalam media hara sebesar 10% dari volume media hara, budidaya dilakukan dalam kondisi statis pada suhu 27 ° C selama 24 hari. Kondisi budidaya dipilih berdasarkan pekerjaan sebelumnya.

Indikator mikrobiologi (jumlah khamir dan bakteri asam asetat) dipantau menggunakan mikroskop B-150 OPTIKA. Pertumbuhan film BC dinilai dengan metode gravimetri (timbangan analitik laboratorium Explorer EX-224), tingkat keasaman aktif dipantau menggunakan ionomer (I-160 MI ionometer). Konsentrasi zat radioaktif dikontrol dengan metode spektrofotometri (spektrofotometer "UNICO-2804", USA) menggunakan reagen dinitrosalisilat, konsentrasi xilosa ditentukan dengan metode standar, yaitu berdasarkan pembentukan furfural dari pentosans.

Struktur selulosa bakteri diperiksa dengan spektrofotometer infra merah "Infralum FT-801" pada tablet KBr.

Hasil penelitian dan pembahasannya

Perubahan jumlah sel ragi dan asam asetat selama budidaya Medusomyces gisevii Sa-12 pada hidrolisat enzimatik dari LCM Miscanthus ditunjukkan pada Gambar. 1, perubahan tingkat keasaman aktif selama budidaya Medusomyces gisevii Sa-12 ditunjukkan pada Gambar. 2.

Konsentrasi sel ragi dalam media nutrisi selama budidaya ditemukan pada urutan yang lebih tinggi daripada bakteri asam asetat. Untuk khamir tidak diamati fase lag, peningkatan konsentrasi sel terjadi dari 0 menjadi 12 hari, setelah 12 hari terjadi fase kematian. Untuk bakteri asam asetat diamati fase lag, sampai 8 hari jumlahnya bertambah, dari 8 hari menjadi 10 hari jumlah sel tetap konstan, setelah 10 hari terjadi fase kematian.

Angka: 3. Ketergantungan konsentrasi zat radioaktif dan hasil BC pada lama budidaya

Selama budidaya kultur simbiosis Medusomyces gisevii dalam media nutrisi, sebagai hasil dari aksi mekanisme perlindungan, produk antara glikolisis terakumulasi: asetat, asam glukonat, etanol, dan gliserol; secara tidak langsung, akumulasinya dapat dinilai dari perubahan pH. Keasaman aktif awal media nutrien adalah 4,0; sebelum hari keenam budidaya nilai pH turun menjadi 3,8. Selanjutnya pada proses budidaya, nilai keasaman aktif medium meningkat menjadi 5,9. Peningkatan keasaman aktif tidak khas untuk produsen ini; namun, ketergantungan serupa dijelaskan ketika produsen Gluconacetobacter xylinus CH001 dibudidayakan pada asam hidrolisat miscanthus.

Dalam gambar. Gambar 3 menunjukkan ketergantungan konsentrasi RS dan hasil BC pada lama budidaya.

Konstanta laju penggunaan substrat dihitung dengan rumus:

dimana Ku.with. - konstanta pemanfaatan substrat, hari-1; S1, S2 - konsentrasi zat radioaktif pada saat-saat awal dan akhir waktu; t1, t2 - momen awal dan akhir waktu, hari.

Angka: 4. Spektrum IR sampel BC

Pemanfaatan substrat terjadi dalam dua periode yaitu dari budidaya 0 sampai 6 hari, konstanta laju pemanfaatan substrat 0,234 hari-1, dari 6 ke 24 mengalami penurunan nilai 12 kali dan sebesar 0,020 hari-1. Pemanfaatan cepat zat radioaktif dari 0 hingga 6 hari dikaitkan dengan konsumsi substrat oleh mikroorganisme dan reproduksi aktifnya. Dari 6 hingga 24 hari, RV perlahan-lahan dihabiskan untuk menjaga aktivitas vital mikroorganisme.

Hidrolisat LCM Miscanthus sebagian besar terdiri dari glukosa, konsentrasi xilosa pada saat nol adalah 1,2 g / l. Pada budidaya hari ke-7 konsentrasi total RS adalah 4,9 g / L, sedangkan jumlah xilosa dalam hidrolisat praktis tidak berubah yaitu sebesar 0,8 g / L. Setelah 24 hari budidaya, konsentrasi RV dalam media nutrisi adalah 3,4 g / l, dan xilosa - 0,3 g / l.

Tingkat sintesis produk (selulosa bakteri) dihitung dengan rumus

dimana Ks.p. - konstanta sintesis produk, hari-1; C1, C2 - massa produk pada saat awal dan akhir waktu; t1, t2 - momen awal dan akhir waktu, hari.

Pada hari pertama budidaya, film gel BC yang diucapkan dengan jelas tidak diamati pada permukaan media nutrisi. Pada hari kedua budidaya, terbentuk film gel BC tipis. Peningkatan utama biomassa terjadi dari 2 menjadi 6 hari budidaya - keluaran BC meningkat dari 1,1% menjadi 4,7%; konstanta laju untuk sintesis produk selama periode ini adalah 0,363 hari-1. Dari 6 sampai 10 hari, hasil BC meningkat menjadi 5,6%, konstanta laju sintesis produk selama periode ini menurun menjadi 0,044 hari-1. Selanjutnya, tingkat sintesis BC menurun, cenderung ke nol.

Dari 10 hingga 24 hari, hasil BC menurun menjadi 1%, yang menunjukkan proses destruksi yang sedang berlangsung, periode ini bertepatan dengan fase kematian bakteri ragi dan asam asetat. Dengan demikian, dalam prakteknya, awal dari fase kematian mikroorganisme dapat dijadikan sebagai kriteria akhir dari proses biosintesis BC.

Hidrolisat enzimatik dari miscanthus LCM bukanlah media nutrisi yang menguntungkan untuk biosintesis BC, hasil BC tertinggi adalah 5,6%, yaitu 1,6 kali lebih sedikit dari hasil BC pada media nutrisi sintetis ketika Medusomyces gisevii Sa-12 dibudidayakan dalam kondisi yang sama - 9, 0%. Diduga, hal ini dapat dijelaskan dengan metode perlakuan awal bahan baku dan adanya pengotor dalam hidrolisat enzimatik dari miscanthus LCM, yang dapat menghambat biosintesis BC. Dengan demikian, kualitas hidrolisat enzimatis Miscanthus LCM yang baik untuk biosintesis etanol bukan merupakan jaminan kualitas yang baik untuk biosintesis BC, hal ini disebabkan tingginya tuntutan kualitas media nutrisi produsen simbiosis Medusomyces gisevii Sa-12 dibandingkan dengan Saccharomyces cerevisiae. Dapat diasumsikan bahwa untuk biosintesis BC yang berhasil, substrat yang lebih murni harus digunakan, misalnya, selulosa miscanthus komersial.

Dalam gambar. Gambar 4 menunjukkan spektrum IR dari sampel BC yang disintesis pada hidrolisat enzimatik dari LMC Miscanthus.

Pada spektrum inframerah sampel BC, terdapat pita intens pada 3381 cm-1, yang menunjukkan getaran regangan gugus OH. Pita yang kurang kuat pada 2917 cm-1 disebabkan oleh getaran regangan dari gugus CH2, CH. Dalam spektrum BC, pita dalam rentang 2000-1500 cm-1 termasuk dalam getaran tekukan gugus OH dari air yang terikat kuat. Pita serapan lemah dalam kisaran: 1430-1370 cm-1 disebabkan oleh getaran tekukan gugus CH2; 1360-1320 cm-1 - getaran lentur gugus OH dalam CH2OH. Pita pada 1281 dan 1235 cm-1 menunjukkan getaran lentur gugus OH dalam alkohol. Pita pada 1204 cm-1 menunjukkan getaran tekukan gugus OH. Pita absorpsi dalam kisaran 1000-1200 cm-1 terutama disebabkan oleh getaran regangan C-O-C dan C-O dalam alkohol. Dengan demikian, dipastikan dengan metode IR bahwa BC yang diperoleh pada hidrolisat enzimatik LCM merupakan senyawa murni yang hanya mengandung selulosa.

Proses biosintesis BC dengan kultur simbiosis Medusomyces gisevii Sa-12 pada hidrolisat enzimatik dari Miscanthus LCM telah dipelajari. Pemanfaatan utama substrat terjadi pada 6 hari budidaya, konstanta pemanfaatan substrat 0,236 hari-1. Ditemukan bahwa jumlah bakteri asam asetat selama budidaya lebih kecil daripada jumlah ragi, dan setelah 10 hari adalah 1,1 CFU / ml. Telah dibuktikan bahwa dalam prakteknya, dimulainya fase kematian mikroorganisme simbiosis dapat dijadikan sebagai kriteria akhir dari proses biosintesis, karena fase ini bertepatan dengan proses penghancuran BC. Hasil penelitian menunjukkan bahwa hidrolisat enzimatis LCM miscanthus bukan merupakan media nutrien jinak untuk biosintesis BC: hasil BC pada hari ke 10 budidaya adalah 5,6%, yaitu 1,6 kali lebih sedikit dari hasil BC pada media nutrien sintetik, dan pada hari ke 24 hasil menurun hingga 1,0%, yaitu, BC mengalami kehancuran. Spektroskopi inframerah menunjukkan bahwa BC adalah senyawa murni yang hanya mengandung selulosa.

Studi ini didukung oleh dana dari Yayasan Sains Rusia (proyek No. 17-19-01054).

Referensi bibliografi

Gladysheva E.K. BIOSINTESIS SELULOSA BAKTERI PADA HIDROLISAT ENZIMATIF BAHAN LIGNOSELULOSA MISCANTHUS // Penelitian fundamental. - 2017. - No. 9-2. - S. 290-294;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id\u003d41742 (tanggal akses: 13.12.2019). Kami meminta perhatian Anda pada jurnal yang diterbitkan oleh "Academy of Natural Sciences"